Entre as diversas técnicas para diagnóstico da covid-19, destaca-se o teste genético. Considerando as diferentes variantes e cargas virais, um exemplo é a PCR, reação efetuada por uma enzima do tipo polimerase. Essa técnica permite identificar, com confiabilidade, o material genético do SARS-CoV-2, um vírus de RNA. Para comprovação da infecção por esse coronavírus, são coletadas amostras de secreções do indivíduo. Uma etapa que antecede a reação de PCR precisa ser realizada para permitir a amplificação do material genético do vírus.
Essa etapa deve ser realizada para
A) concentrar o RNA viral para otimizar a técnica.
B) identificar nas amostras anticorpos anti-SARS-CoV-2.
C) proliferar o vírus em culturas, aumentando a carga viral.
D) purificar ácidos nucleicos virais, facilitando a ação da enzima.
E) obter moléculas de cDNAviral por meio da transcrição reversa.
Resolução em Texto
Matérias Necessárias para a Solução da Questão:
✔ Biologia Molecular
✔ Genética
✔ Técnicas laboratoriais
Nível da Questão:
✔ Médio – Exige conhecimento sobre o funcionamento da PCR e a conversão de RNA em cDNA.
Gabarito:
✅ Alternativa E (obter moléculas de cDNA viral por meio da transcrição reversa).
📝 Passo 1: Análise do Comando e Definição do Objetivo
📌 Comando da questão:
“Uma etapa que antecede a reação de PCR precisa ser realizada para permitir a amplificação do material genético do vírus. Essa etapa deve ser realizada para…”
📌 Palavras-chave:
✔ “PCR” → Técnica de Reação em Cadeia da Polimerase
✔ “RNA viral” → Material genético do SARS-CoV-2
✔ “Amplificação” → Processo de replicação do material genético
✔ “Etapa que antecede” → Processo necessário antes da PCR
📌 Objetivo:
A questão pede a identificação de um processo necessário antes da PCR para permitir a amplificação do material genético do SARS-CoV-2, um vírus de RNA.
📌 Dica Geral:
Sempre que a PCR for mencionada em testes de RNA, é necessário lembrar da transcrição reversa. Isso ocorre porque a PCR convencional só amplifica DNA, e vírus de RNA precisam ser convertidos para cDNA antes do processo.
📝 Passo 2: Explicação de Conceitos Necessários
📌 O que é PCR?
🔹 A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica de laboratório usada para amplificar sequências de DNA, tornando possível a detecção de pequenas quantidades de material genético em amostras biológicas.
📌 O que é transcrição reversa?
🔹 Como o SARS-CoV-2 é um vírus de RNA, antes da PCR, é necessário converter esse RNA em DNA complementar (cDNA). Esse processo é realizado por uma enzima chamada transcriptase reversa, permitindo que o DNA seja amplificado na PCR.
📌 Por que a PCR é tão eficiente no diagnóstico da Covid-19?
✔ Detecta quantidades mínimas de RNA viral.
✔ É altamente específica, identificando variantes do vírus.
✔ Permite um diagnóstico confiável em estágios iniciais da infecção.
📝 Passo 3: Tradução e Interpretação do Texto
📌 Contexto da Questão:
🔹 A questão menciona que o teste genético utilizado para detectar a Covid-19 é a PCR. No entanto, para que a técnica funcione corretamente, é necessário um passo anterior à amplificação do material genético.
📌 Frases-chave do enunciado:
✔ “PCR, reação efetuada por uma enzima do tipo polimerase” → A polimerase só atua em DNA.
✔ “Material genético do SARS-CoV-2, um vírus de RNA” → O vírus não possui DNA, então precisa ser convertido.
✔ “Etapa que antecede a reação de PCR” → Indica um processo antes da amplificação.
📌 Conclusão parcial:
A etapa anterior à PCR deve envolver a conversão do RNA viral em DNA complementar (cDNA), que é o que permite a amplificação do material genético.
📝 Passo 4: Desenvolvimento do Raciocínio e Cálculos
📌 Passo a Passo do Diagnóstico por PCR para SARS-CoV-2:
1️⃣ Coleta de amostra do paciente (secreção nasal ou orofaríngea).
2️⃣ Extração do RNA viral presente na amostra.
3️⃣ Conversão do RNA viral em cDNA por transcrição reversa.
4️⃣ Amplificação do cDNA através da PCR.
5️⃣ Análise dos resultados para detectar a presença do vírus.
📌 Importante!
A transcrição reversa é obrigatória nesse processo, pois a PCR só amplifica DNA, e o SARS-CoV-2 é um vírus de RNA.
📝 Passo 5: Análise das Alternativas
✅ Alternativa Correta: E) Obter moléculas de cDNA viral por meio da transcrição reversa.
✔ Como explicado nos passos anteriores, a PCR só amplifica DNA, então a conversão do RNA viral em cDNA é um passo essencial antes da amplificação.
❌ Alternativa Incorreta: A) Concentrar o RNA viral para otimizar a técnica.
✔ Erro: A concentração de RNA viral não é suficiente para permitir a amplificação pela PCR, pois ela só funciona com DNA. A transcrição reversa ainda seria necessária antes da amplificação.
❌ Alternativa Incorreta: B) Identificar nas amostras anticorpos anti-SARS-CoV-2.
✔ Erro: Testes de PCR não detectam anticorpos. Anticorpos são detectados em testes sorológicos, como testes rápidos de Covid-19. A PCR apenas identifica a presença do material genético do vírus.
❌ Alternativa Incorreta: C) Proliferar o vírus em culturas, aumentando a carga viral.
✔ Erro: A PCR não necessita da replicação do vírus em laboratório. A técnica consegue detectar pequenas quantidades de material genético viral sem precisar cultivá-lo.
❌ Alternativa Incorreta: D) Purificar ácidos nucleicos virais, facilitando a ação da enzima.
✔ Erro: Embora a purificação dos ácidos nucleicos possa ajudar na eficiência da PCR, o principal problema continua sendo a necessidade de conversão do RNA em DNA. A purificação sozinha não resolve essa limitação.
📌 Dica Geral: ⚠️ Muitas questões sobre PCR em vestibulares apresentam alternativas que misturam conceitos de testes imunológicos e técnicas genéticas. É essencial lembrar que a PCR detecta material genético, enquanto testes sorológicos detectam anticorpos.
📝 Passo 6: Conclusão e Justificativa Final
📌 Conclusão:
A PCR é uma técnica de amplificação de DNA, e o SARS-CoV-2 possui um genoma de RNA. Assim, antes da PCR, o RNA precisa ser convertido em DNA complementar (cDNA) por meio da transcrição reversa, realizada pela enzima transcriptase reversa.
📌 Resumo Final: 🔍
✔ A PCR não amplifica RNA, apenas DNA.
✔ O RNA viral do SARS-CoV-2 precisa ser convertido em cDNA antes da amplificação.
✔ Esse processo é chamado de transcrição reversa.
✔ A alternativa correta é E) Obter moléculas de cDNA viral por meio da transcrição reversa.
✅ Alternativa correta: E
🧠 Dica Extra:
Em provas de vestibulares e do ENEM, questões sobre PCR e transcrição reversa são frequentes, especialmente no contexto da Covid-19. Sempre verifique se a pergunta envolve um vírus de RNA (como o SARS-CoV-2) e lembre-se de que a PCR precisa de cDNA para funcionar!
